雙縮脲試劑是一種用于鑒定蛋白質(zhì)的分析化學(xué)試劑。它是一種堿性的含銅試液，呈藍(lán)色，由0.1g/mL氫氧化鈉或氫氧化鉀、0.01g/mL硫酸銅和酒石酸鉀鈉配制而成。會(huì)遇到蛋白質(zhì)顯紫色。
雙縮脲試劑本是用來(lái)檢測(cè)雙縮脲，由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也能與銅離子在堿性溶液中發(fā)生雙縮脲反應(yīng)。當(dāng)?shù)孜镏泻须逆I時(shí)(多肽)，試液中的銅與多肽配位，絡(luò)合物呈紫色?？赏ㄟ^(guò)比色法分析濃度，在紫外可見(jiàn)光譜中的波長(zhǎng)為540nm。鑒定反應(yīng)的靈敏度為5-160mg/ml。
雙縮脲試劑中真正起作用的是硫酸銅，而氫氧化鉀僅僅是為了提供堿性環(huán)境，因此它可被其他堿，如氫氧化鈉所代替。向試劑中加入碘化鉀，會(huì)延長(zhǎng)試劑的使用壽命。酒石酸鉀鈉的作用是保護(hù)反應(yīng)生成的絡(luò)離子不被析出變?yōu)槌恋?從而使試劑失效。
雙縮脲試劑原理具體如下：
雙縮脲試劑本是用來(lái)檢測(cè)雙縮脲，由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此也能與銅離子在堿性溶液中發(fā)生雙縮脲反應(yīng)。當(dāng)?shù)孜镏泻须逆I時(shí)(多肽)，試液中的銅與多肽配位，配合物呈紫色。可通過(guò)比色法分析濃度，在紫外可見(jiàn)光譜中的波長(zhǎng)為540nm。鑒定反應(yīng)的靈敏度為5-160mg/ml。
雙縮脲試劑中真正起作用的是硫酸銅，而氫氧化鉀僅僅是為了提供堿性環(huán)境，因此它可被其他堿，如氫氧化鈉所代替。向試劑中加入碘化鉀，可延長(zhǎng)試劑的使用壽命。酒石酸鉀鈉的作用是保護(hù)反應(yīng)生成的絡(luò)離子不被析出變?yōu)槌恋?從而使試劑失效。
另外，在使用雙縮脲試劑時(shí)候，必須注意，必須是先加0.1 g/mL氫氧化鈉溶液，再加0.01 g/mL硫酸銅的水溶液。若先加入硫酸銅[CuSO4]溶液，再加入氫氧化鈉[NaOH]溶液，則無(wú)法充分制造堿性環(huán)境，此時(shí)CuSO4會(huì)與NaOH發(fā)生復(fù)分解反應(yīng)，生成藍(lán)色氫氧化銅[Cu(OH)2]沉淀，導(dǎo)致現(xiàn)象不清，無(wú)法較好地達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?
雙縮脲試劑是由雙縮脲試劑A和雙縮脲試劑B兩種試劑組成。
雙縮脲試劑A的成分是氫氧化鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1 g/mL的水溶液。
雙縮脲試劑B的成分是硫酸銅的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01 g/mL的水溶液。
雙縮脲試劑可以驗(yàn)證蛋白質(zhì)的存在。
具體方法如下：
先將雙縮脲試劑A加入組織樣液,搖蕩均勻(必須營(yíng)造堿性環(huán)境),在加入雙縮脲試劑B,搖蕩均勻.如果組織里含有蛋白質(zhì),那么會(huì)看到溶液變成紫色.具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物皆可與雙縮脲試劑產(chǎn)生紫色反應(yīng).蛋白質(zhì)的肽鍵在堿性溶液中能與Cu2+絡(luò)合成紫紅色的化合物.顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比。
雙縮脲(NH2CONHCONH2)是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱,放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物。
