在現(xiàn)代的一些醫(yī)療實(shí)驗(yàn)當(dāng)中，經(jīng)常會做陽性對照這樣的實(shí)驗(yàn)，那么細(xì)胞凋亡陽性對照檢測怎么做呢？今天小編這樣詳細(xì)為您講解一下這方面的常識，歡迎閱讀和品鑒。

在細(xì)胞凋亡過程中伴隨著一系列的形態(tài)特征改變，細(xì)胞膜的改變是這些特征中較早出現(xiàn)的一種。在凋亡細(xì)胞中，細(xì)胞膜磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的外側(cè)。Annexin-V是一種35-36 KD的鈣粒子依賴的磷脂結(jié)合蛋白，它對PS具有較高的親和力。細(xì)胞凋亡時，可以和外翻的PS結(jié)合，從而可以檢測凋亡的細(xì)胞。發(fā)生死亡的細(xì)胞其細(xì)胞膜上的PS也外翻，因而也會陽性。因此，常用的凋亡試劑盒除了采用Annexin-V標(biāo)記之外，還會加一種DNA染料，常用的有PI和7-AAD，由于死亡的細(xì)胞膜通透性增高，染料可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)和DNA結(jié)合，從而可以發(fā)熒光，區(qū)分出死細(xì)胞。

在使用FAS單抗誘導(dǎo)前后的檢測結(jié)果中，橫坐標(biāo)是Annexin-V FITC, 縱坐標(biāo)是PI，左上、右上、左下、右下四個象限中右上象限代表死亡的細(xì)胞，左下象限是存活的細(xì)胞，右下象限是凋亡的細(xì)胞。

在采用Annixin V方法檢測凋亡細(xì)胞時，要特別強(qiáng)調(diào)一點(diǎn)：該方法適用于懸浮生長的細(xì)胞，如：淋巴細(xì)胞等細(xì)胞的檢測。對于貼壁生長的細(xì)胞，由于在胰酶等消化處理過程中會造成細(xì)胞膜的損傷，會造成較高的假陽性，從而影響檢測結(jié)果。盡管目前，包括國外也有一些單位采用該方法檢測貼壁生長的細(xì)胞。我不推薦用該方法檢測。因?yàn)槠渲貜?fù)性較差，且需要操作時非常小心。

DNA周期檢測原本是用來反應(yīng)細(xì)胞各個期，即細(xì)胞增殖狀況的。利用細(xì)胞內(nèi)DNA能夠和熒光染料，如PI結(jié)合的特性。細(xì)胞各個時期由于其DNA含量不同從而結(jié)合的熒光染料不同，流式檢測的熒光輕度也不一樣。G2-M期DNA含量是G0-G1的兩倍，而S期介于兩者之間。

但是由于發(fā)現(xiàn)凋亡的細(xì)胞DNA含量較少，因而可以在細(xì)胞G0-G1期前面有一個亞二倍體峰，從而認(rèn)為是凋亡細(xì)胞。但是由于死亡的細(xì)胞本身其DNA含量也是減少的，因而非常難于區(qū)分凋亡和死亡的細(xì)胞。在90年代，該方法曾經(jīng)風(fēng)靡一時，現(xiàn)在看來，那時的實(shí)驗(yàn)結(jié)果需要推敲。盡管，經(jīng)典的流式檢測資料給出的圖是認(rèn)為凋亡的細(xì)胞是緊挨著G0-G1期峰的一個峰，死亡的細(xì)胞峰離G0-G1期峰較遠(yuǎn)，但是這種典型的結(jié)果似乎很難獲得。有其它的替代方法，完全可以不用這種方法。

建議采用原裝大廠的試劑盒，并且嚴(yán)格的設(shè)立對照。經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn)方法穩(wěn)定后再進(jìn)行大規(guī)模實(shí)驗(yàn)。標(biāo)本處理后，均可以用熒光纖維鏡進(jìn)行觀察，拍照。流式檢測后，可以進(jìn)行精確的計算凋亡百分比。

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