雙縮脲試劑中真正起作用的是 硫酸銅,而氫氧化鉀僅僅是為了提供堿性環(huán)境,因此它可被其他堿,如氫氧化鈉所代替,那么雙縮脲試劑優(yōu)缺點(diǎn)有哪些呢?一起隨小編來(lái)看看吧。
雙縮脲試劑是需要其中的銅離子與肽鍵反應(yīng),本來(lái)這種物質(zhì)是用來(lái)鑒定雙縮脲的,因?yàn)殡p縮脲和蛋白質(zhì)都具有肽鍵所以也可以用來(lái)鑒定蛋白質(zhì),那么雙縮脲試劑優(yōu)缺點(diǎn)有哪些呢?下面就一起隨佰佰安全網(wǎng)小編來(lái)了解一下吧。
雙縮脲(NH3CONHCONH3)是兩個(gè)分子脲經(jīng)180℃左右加熱,放出一個(gè)分子氨后得到的產(chǎn)物,在強(qiáng)堿性溶液中,雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物,雙縮脲反應(yīng)產(chǎn)生的紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān),故可用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量。
雙縮脲試劑的優(yōu)點(diǎn)
雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)測(cè)定范圍能夠是1~10mg蛋白質(zhì),操作簡(jiǎn)單、快捷。既適合手工操作,又適合自動(dòng)化分析,重復(fù)性好、線性關(guān)系好, 雙縮脲試劑可以長(zhǎng)期保存( 若貯存瓶中有黑色沉淀出現(xiàn),則需要重新配制)。
雙縮脲試劑的缺點(diǎn)
靈敏度差,測(cè)定范圍窄,樣品需要量大,不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近,因此它常用于需要快速,但并不需要十分精確的蛋白質(zhì)測(cè)定。 干擾測(cè)定的物質(zhì)包括有:在性質(zhì)上是氨基酸或肽的緩沖液,如TrIs緩沖液,因?yàn)樗鼈儺a(chǎn)生陽(yáng)性呈色反應(yīng),銅離子也容易被還原,有時(shí)出現(xiàn)紅色沉淀。
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責(zé)任編輯:王小麗
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